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2024透射電鏡樣本準備方法及要求
更新時間:2024-05-07   點擊次數:846次

                                           

透射電鏡樣本準備方法及要求

 

以下所有樣本必須新鮮,固定液或懸浮液都不得冷凍結冰

 

1、 動物組織樣本

① 1-3min內取樣,取材前可提前準備裝有電鏡固定液的培養皿,將小組織塊離體取下后立即投入培養皿內,用手術刀在培養皿的固定液中進行切割成小塊,取樣組織體積控制在以下尺寸(1mmX1mm×1mm正方體、1mm×1mm×3mm長方體狀、1mm×2mm×3mm薄片狀)。固定液滲透能力有限,超出此范圍后組織會無法固定,后續實驗無法完成,務必請重視此過程


圖片1.png

 

 

 

 

 

 

 

② 取材時盡量精確到需要觀察的目的部位(如觀察腎小球取腎皮質;觀察胰島取胰島豐富的胰尾;皮膚,腸胃等在固定液中易打卷的組織可將組織粘在濾紙上進行固定)。

③ 取材時一定注意避免鑷子擠壓等機械損傷,刀片要鋒利避免挫傷組織。

④ 組織取下后立即投入電鏡固定液內4度避光固定24h,再轉移至4°保存,4°冰袋運輸,在保存和運輸過程中樣本和冰袋需間隔,固定液切勿冷凍結冰。4°時樣本可保存1個月左右

2、 植物組織樣本

① 取材要求同動物組織樣本。

② 組織投入固定液后需要進行真空抽氣讓組織沉底,如無條件抽氣可用濾紙將組織塞進固定液內,組織不能漂浮在固定液表面。(抽氣做出來的效果會好一些)

3、 細胞樣本

貼壁細胞:

看細胞凋亡的,需要把培養液中的細胞也離心收集后固定

方法一:消化法(實驗目的不涉及觀察細胞膜相關的內容  如:觀察緊密連接

①培養好的細胞(細胞密度不超過70%)棄培養基,加入胰酶消化。

②胰酶消化好后(時間不宜過長),加培養基終止消化,吸管輕輕吹打至細胞起浮。吸入離心管,低速離心(不超過3000轉),3-5min左右,離心后管底要有肉眼可見的細胞沉淀,厚度不要超過2毫米。

③棄上清,緩慢加入電鏡固定液(固定液需提前恢復至室溫)。加固定液過程中不要吹散細胞,如果吹散了需再次低速離心

④4度避光固定24h,再轉移至4°保存,4°冰袋運輸,在保存和運輸過程中樣本和冰袋需間隔,固定液切勿冷凍結冰

方法二:刮取法

①培養好的細胞(細胞密度不超過70%)棄培養基,加入電鏡固定液(固定液需提前恢復至室溫)。

②常溫避光固定5min左右,用細胞刮(或軟橡膠蓋切得平整小方塊)沿一個方向輕輕刮下細胞,切記不要反復刮,避免細胞刮破。

③用巴氏吸管把細胞液吸入離心管內,放入離心機(不超過3000轉),低速離心3-5min左右,離心后管底要有肉眼可見的細胞沉淀,厚度不要超過2毫米。

④棄上清,緩慢加入電鏡固定液(固定液需提前恢復至室溫)。緩慢加入固定液過程中不要吹散細胞,如果吹散了需再次低速離心

 

⑤4度避光固定24h,再轉移至4°保存,4°冰袋運輸,在保存和運輸過程中樣本和冰袋需間隔,固定液切勿冷凍結冰

懸浮細胞:離心收集細胞要肉眼可見細胞沉淀有綠豆大小,棄培養基后加電鏡固定液4度避光固定24h,再轉移至4°保存,4°冰袋運輸,在保存和運輸過程中樣本和冰袋需間隔,固定液切勿冷凍結冰

 

4、 細菌樣本

長于固體培養基的細菌:連帶著培養基一起挑下細菌放于電鏡固定液內4度避光固定24h,再轉移至4°保存, 4°冰袋運輸,在保存和運輸過程中樣本和冰袋需間隔,固定液切勿冷凍結冰

 

懸浮細菌孢子等:離心收集細菌要肉眼可見細菌沉淀綠豆大小,棄培養基后加電鏡固定液4度避光固定24h,再轉移至4°保存,4°冰袋運輸,在保存和運輸過程中樣本和冰袋需間隔,固定液切勿冷凍結冰

5、 病毒

破碎組織細胞,粗離心去除細胞碎片取上清,超速離心分離出病毒(病毒提取的過程需要客戶自己完成)。用緩沖液(如PBS)懸浮病毒,體積至少50ul,遠距離干冰凍存運輸,近距離4°保存運輸,盡快滴片做負染后及時電鏡觀察拍照。(噬菌體 4度運輸

6、 外泌體囊泡等

客戶自己完成外泌體囊泡等的提取收集,用緩沖液(如PBS)或者試劑盒中的保存液懸浮,,體積至少50ul,遠距離干冰凍存運輸,近距離4°保存運輸,盡快制片做負染后及時電鏡觀察拍照。(因此類樣品極易降解,樣品越新鮮越好,最好數小時內完成滴片負染,否則做出的效果很不理想甚至觀察不到)

7、 納米材料等無機材料

直接準備粉劑,或用純水或無水乙醇懸浮,常溫保存運輸即可(需要超聲的備注)。做負染后電鏡觀察拍照。

 


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