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Col-R0101 試劑盒應(yīng)用 本試劑盒采用利裂解液配方在 10 分鐘內(nèi)完成細(xì)胞和組織樣本的裂解、提取和純化。無(wú)需使用蛋白酶 K、無(wú)需低溫離心，無(wú)需使用有機(jī)試劑。該配方中含有 RNA 保護(hù)劑，能夠抑制RNA降解、保護(hù)RNA 完整，從而提高 RNA 產(chǎn)量。提取 RNA 可用于 RT-PCR、RT-qPCR、Northern Blot、分子克隆、文庫(kù)構(gòu)建等。 本試劑盒僅供研究使用，不可用于臨床、食品、化妝品等域。

保存條件

室溫保存一年。

自備材料

水浴鍋或金屬浴、無(wú)水乙醇、無(wú) DNase 無(wú) RNase 離心管、DNase I（2U/μL，或貨號(hào)QR0102）使用方法

1. 樣本處理

1.1 從動(dòng)物組織中提取 RNA

1.1.1 取 20-100mg 樣本放入液氮中充分研磨后，加入 700μL 裂解液 C，顛倒混勻。或者取 20-100mg 樣本加入 700μL 裂解液 C，加入 1 顆鋼珠，放入組織研磨器中，研磨1-2 分鐘。備注：不同樣本中 RNA 含量差異很大，過(guò)多使用樣本容易導(dǎo)致堵塞，終導(dǎo)致RNA提取量下降。

1.1.2 55℃孵育 1 分鐘。

1.1.3 12,000rpm 離心 1 分鐘，取 500μL 上清。

1.1.4 加入 250μL 無(wú)水乙醇，充分混勻。按照步驟 2.1-2.7 操作。

1.2 從懸浮細(xì)胞中提取 RNA

1.2.1 細(xì)胞 1,000rpm 離心 5 分鐘，收集細(xì)胞沉淀。

1.2.2 細(xì)胞數(shù)量為<5x106個(gè)時(shí)，加入 500uL 解液 C。細(xì)胞數(shù)量為 5x106~1x107個(gè)時(shí)，加入 700uL 裂解液 C。輕輕吹打混勻。55C孵育 1分鐘。

1.2.3 12.000rpm 離心1 分鐘。

1.2.4 細(xì)胞數(shù)量為 5×10 6個(gè)時(shí)，取 450μL 上清。細(xì)胞數(shù)量為 5×10 6~1×10 7個(gè)時(shí)，取650μL 上清。

1.2.5 加入 0.5 倍體積無(wú)水乙醇，充分混勻。按照步驟 2.1-2.7 操作。

1.3 從貼壁細(xì)胞中提取 RNA

1.3.1 胰酶消化細(xì)胞后 1,000rpm 離心 5 分鐘，收集細(xì)胞沉淀。

1.3.2 細(xì)胞數(shù)量為<5×10 6個(gè)時(shí)，加入 500μL 裂解液 C。細(xì)胞數(shù)量為 5×10 6~1×10 7個(gè)時(shí)，加入700μL裂解液 C。輕輕吹打混勻。55℃孵育 1 分鐘。 1.3.3 12,000rpm 離心 1 分鐘。 1.2.4 細(xì)胞數(shù)量為><5×10 6個(gè)時(shí)，取 450μL 上清。細(xì)胞數(shù)量為 5×10 6~1×10 7個(gè)時(shí)，取650μL上清。1.2.5 加入 0.5 倍體積無(wú)水乙醇，充分混勻。按照步驟 2.1-2.7 操作。>為<5×10 6個(gè)時(shí)，取 450μL 上清。細(xì)胞數(shù)量為 5×10 6~1×10 7個(gè)時(shí)，取650μL上清。1.2.5 加入 0.5 倍體積無(wú)水乙醇，充分混勻。按照步驟 2.1-2.7 操作。

2. RNA 純化

2.1 全部加入 RNA 吸附柱中，12,000rpm 離心 1 分鐘，倒掉收集管中廢液。

2.2 向 RNA 吸附柱中加入 500μL 洗滌液 CW1，12,000rpm 離心 30 ，倒掉收集管中廢液。

2.3 向 RNA 吸附柱中加入 500μL 洗滌液 CW2，12,000rpm 離心 30 ，倒掉收集管中廢液。

2.4 重復(fù)步驟 2.3 一次。

2.5 12,000rpm 離心 2 分鐘，倒掉收集管中廢液。

2.6 將 RNA 吸附柱放入無(wú) DNase 無(wú) RNase 離心管中，加入 30-50μL 洗脫液C，室溫放置1 分鐘。

2.7 12,000rpm 離心 2 分鐘，得到 RNA 溶液，-80℃保存。

注意事項(xiàng)

1. 務(wù)必在超凈臺(tái)中進(jìn)行操作，常換手套，防止 RNA 降解。

2. 盡可能使用新鮮樣本進(jìn)行 RNA 提取。

3. 使用無(wú) DNase 無(wú) RNase 的吸頭和離心管，防止 RNA 降解，常更換吸頭，防止交叉污染。

4. 為了提高洗脫效率，可提將洗脫液 C 置于 65℃水浴后再使用。

5. 根據(jù)后續(xù)試驗(yàn)需求，請(qǐng)使用 DNase I（貨號(hào) QR0102）進(jìn)行基因組清除。