無血清培養(yǎng)能否成功的關鍵因素有哪些
更新時間：2021-01-22 點擊次數：1060次
血清仍是動物細胞培養(yǎng)中基本的的添加物，尤其是在原代培養(yǎng)或者細胞生長狀況不良時，常常會先使用有血清的培養(yǎng)液進行培養(yǎng)，待細胞生長旺盛以后，再換成無血清培養(yǎng)液。細胞轉入無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)要有一個適應過程，一般要逐步降低血清濃度，從10%減少到5%，3%，1%，直至無血清培養(yǎng)。在降低過程中要注意觀察細胞形態(tài)是否發(fā)生變化，是否有部分細胞死亡，存活細胞是否還保持原有的功能和生物學特性等。在實驗后這些細胞一般不再繼續(xù)保留，很少有細胞能夠長期培養(yǎng)于無血清培養(yǎng)基而不發(fā)生改變的。細胞轉入無血清培養(yǎng)之前，要留有種子細胞，種子細胞按常規(guī)培養(yǎng)于含血清的培養(yǎng)基中，以保證細胞的特性不發(fā)生變化。
為了使細胞適應無血清培養(yǎng)，關鍵的是使所培養(yǎng)細胞：
1.處于對數生長中期
2.>90% 活細胞率
3.適應時以較高的起始細胞接種
細胞適應無血清培養(yǎng)基的方法
1.直接適應——細胞從添加血清的培養(yǎng)基轉換到無血清培養(yǎng)基（SFM）中。
一些類型細胞可直接從包含血清的培養(yǎng)基適應無血清培養(yǎng)基。對于直接適應，接種細胞密度應該:2.5×10~3.5×10細胞/ml。當細胞密度達到1×10~3×10細胞/ml時，傳代培養(yǎng)細胞。當細胞密度在培養(yǎng)4到7天后達到2×10~4×10細胞/ml時，細胞*適應了無血清培養(yǎng)基。每隔3~5天，當細胞密度達到1×10~3×10細胞/ml，細胞活率在90%時，貯備的適應了無血清培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)物應該再次傳代培養(yǎng)。
2.連續(xù)適應——分好幾步把細胞從添加血清的培養(yǎng)基轉換到無血清培養(yǎng)基（SFM）中，與直接適應相比較，連續(xù)適應趨向對于細胞更加溫和一些。
?。?）以2倍正常接種密度接種生長活躍的細胞培養(yǎng)物到75%有血清培養(yǎng)基：25%SFM 混合培養(yǎng)基中，傳代培養(yǎng)。
（2）當細胞密度>5×10細胞/ml時，以2×10到3×10細胞/ml細胞密度，在有血清培養(yǎng)基：SFM為50∶50的混合培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。
?。?）以2×10到3×10細胞/ml細胞密度，25%有血清培養(yǎng)基和75% SFM中傳代培養(yǎng)。
?。?）當細胞密度達到1×10到3×10細胞/ml（接種后4到6天），在100%SFM培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。
?。?）每隔3到5天，當細胞密度達到1×10到3×10細胞/ml，細胞活率在90%時，貯備的適應了無血清培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)物應該再次傳代培養(yǎng)。
建議備份前一次混合培養(yǎng)的培養(yǎng)物，直到每一次細胞適應了新的混合培養(yǎng)基。每一次減少血清前，可能需要在SFM/有血清混合培養(yǎng)基中進行幾次傳代。
在適應過程中，不要讓細胞生長過度。這將增加選擇亞群的可能性。需要注意，與有血清培養(yǎng)基相比，大部分SFM包含非常少的蛋白質，因而更易于受外界因素的影響。
細胞培養(yǎng)適應替代血清：許多細胞利用連續(xù)適應方法能很好的適應，用包含FBS的的培養(yǎng)基和包含有替代血清的培養(yǎng)基1∶1（v∶v）的混合培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞。通過下列的混合培養(yǎng)基的方式，連續(xù)幾代減少當前培養(yǎng)基的量：1∶2，1∶4，1∶16和100%替代培養(yǎng)基。每次適應改變血清比例時，傳代細胞2到3次。
培養(yǎng)可以直接從FBS轉換到替代血清。一開始就使用相同于FBS的濃度的替代物或血清，生長的延遲可能會發(fā)生，4允許進行2到3次的傳代，使生長率恢復到以前的水平。
特別需要強調的是：配制無血清培養(yǎng)液必須使用高質量的水，如石英玻璃蒸餾器經三次蒸餾或超純水凈化裝置制備的水。因為無血清培養(yǎng)基缺乏了血清中天然成分中和毒素、保護細胞的大分子，既便水中的有毒物質含量甚微，也可能對細胞產生致死性損害。這是無血清培養(yǎng)能否成功的關鍵因素之一。
