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在6孔板中用Zeta Life Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑高效率轉(zhuǎn)染RAW 264.7細胞方法總結(jié)。

實驗方案如下：

一、質(zhì)粒DNA準備

1、質(zhì)粒DNA濃度700ng/ul（注意：①溶解于無菌雙蒸水或超純水；②無內(nèi)毒素），

二、操作流程

1、先將細胞接種到6孔板細胞培養(yǎng)板，細胞匯合度在70%左右，再進行轉(zhuǎn)染。

2、復合物制備：將質(zhì)粒DNA與Zeta Life Advanced Transfection Reagent 貨號AD600150轉(zhuǎn)染試劑按照1:1（12ug:12ul）關(guān)系直接混合，用移液器吹吸10-15次混勻，室溫靜止10-15分鐘。

3、將復合物加入*培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)板，并輕輕混勻，放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)（不建議把復合物加入到無血清的培養(yǎng)基里面，后期會進一步摸索此條件）。

4、轉(zhuǎn)染24小時后對細胞進行正常換液。

5、質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染48小時后熒光檢測轉(zhuǎn)染效率

下圖是用Zeta Life Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染raw 264.7細胞的熒光和明場圖片

三、美國Zeta Life Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑信息：

四、RAW 264.7細胞簡述：

RAW 264.7小鼠單核巨噬細胞白血病細胞. 此細胞株源自雄性Abelson鼠科白血病病毒誘導的腫瘤。 sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原陰性。此細胞株不分泌可檢測到的病毒顆粒，XC斑點形成試驗陰性。 可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖。 可以抗體依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細胞。